样品(无奶油蛋糕或面包、辣条、中种月饼)2g于50mL具塞离心管中,添加加5%乙醇(含1%氨水)提取,剂含究50℃超声20min,量测理方冷却至室温,定及加219g/L亚铁氰化钾、前处106g/L乙酸锌溶液各2mL,法优涡旋混匀,化研于10000r/min离心5min,糕点上清液转移至50mL容量瓶,中种残渣再提取一次,添加合并2次滤液,剂含究定容至刻度。量测理方取15mL提取液,定及加10mL正己烷,涡旋5min,离心后,吸取下层过滤上机分析。
流动相:甲醇+0.02mol/L乙酸铵(5+95);色谱柱:C18柱4.6×150mm,5μm,太玮科技,1-DMl9H031;波长230nm,进样量:10μL,流速:1.0min/mL。
本次试验没有同时含有4组分的阳性样品,选择了阴性样品(糕点)进行加标试验,考察了水、1%乙醇(1%氨水)、5%乙醇(1%氨水)、1%氨水、5%甲醇(1%氨水)、10%甲醇(1%氨水)、水-乙酸锌-氢氧化钠7种提取溶剂对4组分峰的影响,称取糕点样品14份,每种提取溶剂平行2份,精密加入混合标准使用液2.0mL,按样品(无奶油蛋糕或面包、辣条、月饼)2g于50mL具塞离心管中,加5%乙醇(含1%氨水)提取,50℃超声20min,冷却至室温,加219g/L亚铁氰化钾、106g/L乙酸锌溶液各2mL,涡旋混匀,于10000r/min离心5min,上清液转移至50mL容量瓶,残渣再提取一次,合并2次滤液,定容至刻度。
取15mL提取液,加10mL正己烷,涡旋5min,离心后,吸取下层过滤上机分析,制备供试品溶液,上机测定,得到色谱图,结果见图1,从图中可以看出水-乙酸锌-氢氧化钠作为提取溶剂,存在峰拖尾现象,而且考虑到后期方法学以及高加入量回收样品导致的色谱峰分离度达不到要求,故不考虑5%甲醇(含1%氨水)、10%甲醇(含1%氨水);对于含油脂比较大的辣条类糕点,采用水作为提取溶剂,提取效率不明显,故也不考虑水作为提取溶剂。
因此,提取溶剂为1%乙醇(1%氨水)、5%乙醇(1%氨水)、1%氨水,为进一步确定提取溶剂,本试验对这3种提取溶剂进行加标含量测定,称取糕点、月饼、辣条3类样品各3份,精密加入混合标准使用液2.0mL,样品(无奶油蛋糕或面包、辣条、月饼)2g于50mL具塞离心管中,加5%乙醇(含1%氨水)提取,50℃超声20min,冷却至室温,加219g/L亚铁氰化钾、106g/L乙酸锌溶液各2mL,涡旋混匀,于10000r/min离心5min,上清液转移至50mL容量瓶,残渣再提取一次,合并2次滤液,定容至刻度。取15mL提取液,加10mL正己烷,涡旋5min,离心后,吸取下层过滤上机分析。
按上述制备供试品溶液,上机测定,外标法定量计算各组分含量,结果见表1,从表中可知,对于分类为糕点的样品,无论是糕点、月饼还是辣条,当提取溶剂呈偏碱性时,提取率更高,特别是油脂含量高的样品,偏碱性的环境更好的保护这4种目标物的损失,故提取溶剂在5%乙醇(1%氨水)时,样品所得4组分含量都是最高的,综合考虑,提取溶剂选择为5%乙醇(1%氨水)。
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